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2025-10-23
化妝品回復突變試驗，又稱細菌回復突變試驗，Ames試驗；是評估化妝品原料及終產(chǎn)品是否具有致突變性的關(guān)鍵體外毒理學檢測方法，核心原理是通過觀察受試物能否誘導營養(yǎng)缺陷型細菌恢復合成特定營養(yǎng)素的能力，判斷其是否存在誘發(fā)基因突變的風險。
化妝品回復突變試驗流程
1：菌株活化與純度驗證
從冷凍保存的菌株中取少量菌液，接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，37℃振蕩培養(yǎng)16-24小時（使菌株進入對數(shù)生長期，活性穩(wěn)定）；
取活化后的菌液，涂布于營養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24小時，觀察菌落形態(tài)：需為單一形態(tài)（排除雜菌污染），且菌落數(shù)量符合要求（如每毫升菌液含10?-10?個活菌）。
2：受試物濃度設(shè)定與制備
濃度范圍確定：根據(jù)預試驗結(jié)果（觀察受試物對細菌的毒性，如抑制菌落生長），設(shè)定5-8個濃度梯度（通常覆蓋“無毒性-輕微毒性-明顯毒性”范圍，最高濃度需達到solubility極限或5000μg/皿，特殊情況可調(diào)整）；
受試物制備：固體受試物用溶劑（如DMSO）溶解，液體受試物直接稀釋，確保各濃度組均澄清無沉淀（避免物理干擾菌落觀察）。
3：平板接種與培養(yǎng)
取無菌試管，依次加入：0.1mL活化菌液+0.1mL受試物（或陽性對照/陰性對照）+0.5mLS9混合液（加S9組）/0.5mL磷酸鹽緩沖液（不加S9組），輕輕混勻，室溫孵育20分鐘（讓受試物與細菌充分作用）；
向試管中加入2mL融化的頂層瓊脂（45℃左右，避免燙傷細菌），快速混勻后，立即傾倒至預熱的基本培養(yǎng)基平板上，輕輕轉(zhuǎn)動平板使瓊脂均勻鋪展；
待頂層瓊脂凝固后，將平板倒置放入37℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)48-72小時。
4：結(jié)果觀察與記錄
肉眼觀察每個平板上的回復突變菌落數(shù)（即能在無組氨酸/色氨酸培養(yǎng)基上生長的菌落，為突變菌），并記錄；
同時觀察平板背景：若受試物有毒性，會出現(xiàn)“抑菌圈”（平板中央菌落稀少或無菌落），需在結(jié)果中注明毒性濃度。
化妝品回復突變試驗核心指標
（1）致突變性核心：
菌落數(shù)比值（R），是指計算“受試物組回復突變菌落數(shù)”與“陰性對照組回復突變菌落數(shù)”的比值（R），結(jié)合濃度-效應關(guān)系判定：
陰性（無致突變性）：所有濃度組的R<2，且無明顯的濃度-效應關(guān)系（即菌落數(shù)隨受試物濃度升高無遞增趨勢）；
陽性（有致突變性）：至少一個濃度組的R≥2，且存在明顯的濃度-效應關(guān)系（濃度升高，R隨之增大）；或某一濃度組的R≥2，且重復試驗后結(jié)果一致；
可疑（需進一步驗證）：僅一個濃度組R≥2，但無濃度-效應關(guān)系；或部分濃度組菌落數(shù)波動較大，需重復試驗確認。
（2）其他輔助指標
毒性濃度：出現(xiàn)明顯抑菌（菌落數(shù)較陰性組減少50%以上）或完全無菌落生長的受試物濃度，需在報告中注明（毒性過高可能掩蓋致突變性，需調(diào)整濃度重新試驗）；
代謝活化依賴性：若僅加S9組出現(xiàn)陽性結(jié)果，說明受試物需經(jīng)肝臟代謝活化后才具有致突變性；若僅不加S9組陽性，說明受試物本身直接致突變。
檢驗檢測認證服務機構(gòu)。
整體技術(shù)解決方案。
