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2025-09-10
洗滌劑中的香精、防腐劑、某些表面活性劑等成分，可能作為致敏原引發(fā)人體皮膚過敏反應(yīng)，表現(xiàn)為接觸部位紅斑、丘疹、瘙癢，嚴重時可擴散至全身。與即時發(fā)生的刺激性反應(yīng)不同，致敏性反應(yīng)具有“初次接觸致敏、再次接觸發(fā)病”的特點，隱蔽性更強。洗滌劑皮膚致敏性試驗有哪些方法步驟？
洗滌劑皮膚致敏性試驗方法步驟
（1）局部淋巴結(jié)試驗（LLNA）：是基于淋巴細胞增殖的體外替代試驗，通過檢測洗滌劑成分誘導小鼠耳后淋巴結(jié)淋巴細胞增殖情況，判斷致敏性，無需處死動物，是目前最常用的篩選方法，步驟如下：
1：致敏處理（共3天）
用剃毛刀輕輕剃除小鼠雙耳背部毛發(fā)，面積約1cm×1cm，避免損傷皮膚；
每天1次，用微量移液器吸取25μL試驗樣品（或陽性/陰性對照），均勻涂抹在小鼠雙耳背部皮膚，連續(xù)涂抹3天；
涂抹后觀察小鼠是否出現(xiàn)煩躁、抓撓耳朵等異常反應(yīng)，記錄皮膚是否有紅斑、水腫等刺激性表現(xiàn)。
2：淋巴細胞增殖檢測（第6天）
腹腔注射0.2mL含3H-TdR（放射性活度10μCi）的生理鹽水，標記增殖的淋巴細胞；
注射后5小時，頸椎脫臼處死小鼠，解剖分離雙側(cè)耳后淋巴結(jié)，放入含1mL生理鹽水的研磨器中研磨成單細胞懸液；
用細胞過濾器（200目）過濾懸液，收集單細胞，用冰冷的生理鹽水洗滌3次，去除未結(jié)合的3H-TdR。
3：放射性測量與結(jié)果計算
將處理后的細胞懸液加入閃爍液，用液體閃爍計數(shù)器檢測每分鐘放射性計數(shù)（CPM）；
計算刺激指數(shù)（SI）：SI=試驗組平均CPM÷陰性對照組平均CPM；
若SI≥3，判定為“致敏陽性”；1＜SI＜3為“可疑致敏”；SI≤1為“致敏陰性”。
（2）豚鼠最大化試驗（GPMT）：增強致敏效應(yīng)的經(jīng)典動物試驗，GPMT通過“佐劑預處理+皮內(nèi)注射+表皮涂抹”的組合方式增強致敏效果，靈敏度高，適用于確證性試驗，步驟如下：
1：佐劑預處理（第0天）
剃除豚鼠背部左側(cè)2cm×2cm區(qū)域毛發(fā)，用75%酒精消毒皮膚；
皮內(nèi)注射50μL弗氏完全佐劑（CFA）與試驗樣品的混合液（1:1體積比），形成直徑約5mm的皮丘，共注射3點（呈三角形分布）。
2：致敏階段（第7天）
在同一區(qū)域涂抹0.2mL試驗樣品，用4cm×4cm紗布覆蓋，再用膠布固定，封閉接觸48小時；
48小時后移除敷料，用溫水輕輕清洗殘留樣品，觀察皮膚是否有紅腫、滲液等反應(yīng)。
3：激發(fā)階段（第21天）
剃除豚鼠背部右側(cè)2cm×2cm區(qū)域毛發(fā)（與左側(cè)致敏區(qū)域間隔3cm以上）；
右側(cè)皮膚涂抹0.1mL試驗樣品，左側(cè)涂抹0.1mL陰性對照，均用紗布覆蓋固定，封閉接觸24小時；
移除敷料后，分別在24小時、48小時、72小時觀察并記錄兩側(cè)皮膚反應(yīng)。
4：結(jié)果判定
按“無反應(yīng)（0分）→輕微紅斑（1分）→中度紅斑（2分）→重度紅斑+丘疹（3分）”評分；
計算致敏率：致敏率=（出現(xiàn)2分及以上反應(yīng)的動物數(shù)÷試驗動物總數(shù)）×100%；
致敏率≥30%為“強致敏原”，10%-29%為“中度致敏原”，＜10%為“弱致敏原或非致敏原”。
檢驗檢測認證服務(wù)機構(gòu)。
整體技術(shù)解決方案。
